KR102022408B1 - 다발방패버섯 발효물을 포함하는 항노화 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

다발방패버섯 발효물을 포함하는 항노화 조성물 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 열, 수분 등의 환경으로 인한 노화를 억제하기 위한 항산화 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따르면 그리폴린 및 폴리페놀과 같은 유효성분을 함유한 조성물을 수득할 수 있고, 세포 독성이 없이 항산화 효능을 향상시킬 수 있으며, 칼슘 이온의 세포 내 유입을 억제함으로써 TRPV1 및 MMP-1의 활성을 저해하여 피부 노화 및 탄력 저하를 방지할 수 있고, 즉각적 피부 온도 저하 효과를 향상시킴으로써 피부 노화를 더욱 효과적으로 억제할 수 있다.

Description

다발방패버섯 발효물을 포함하는 항노화 조성물 및 그 제조방법{ANTI-AGING COMPOSITION COMPRISING FERMENTED ALBATRELLUS CONFLUENS PRODUCTS}
본 발명은 유효성분의 함량을 향상시킨 항산화 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 열, 수분 등의 환경으로 인한 노화를 억제하기 위한 항노화 조성물 및 그 제조방법에 관한다.
피부는 외부에서부터 순서대로 표피, 진피 및 피하지방 조직의 3개 층으로 크게 구분되며, 외부 환경에 의한 물리적, 화학적인 자극으로부터 인체를 보호해 주는 기능을 한다. 특히 피부는 인체가 가지고 있는 약 65~70%의 수분, 즉 인체에 필요한 각종 생리 활성 물질을 운반하며, 피부가 부드럽고 촉촉한 상태를 유지할 수 있도록 도와주는 이러한 수분이 체외로 증발되는 것을 조절해 주는 중요한 역할을 한다.
피부의 상태는 외부 환경의 변화 혹은 생활 패턴의 변화, 냉/난방의 인위적인 온도 조절, 태양열 또는 태양광, 사회 생활에서 발생되는 각종 스트레스와 환경 오염으로 인한 피부 스트레스 등의 여러 가지 원인으로 인하여 노화가 촉진된다.
피부의 노화 원인 중, 열 자극에 의한 손상을 방지하기 위하여 종래에는 피부의 온도를 저하시키려는 노력을 하고 있다. 이러한 피부 표면 쿨링의 목적으로 종래의 제품은 민트(mint), 멘톨(menthol), 에리스리톨(erythritol) 등의 성분을 함유하는 조성물을 사용하고 있다.
그러나, 민트, 멘톨과 같은 성분은 눈가 근처에 적용 시 동통 등의 불쾌한 감각을 유발할 수 있으며, 에리스리톨은 피부에 적용 시 알러지를 유발할 수 있으며, 복용 시 위장장애를 유발할 수 있다는 증례가 보고된 바 있다.
이에 따라, 피부 및 체내에 자극을 최소화하면서 항노화 효과를 향상시키기 위한 조성물에 관한 연구가 요구된다.
본 발명의 목적은 항노화 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 상기 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은
다발방패버섯(Albatrellus confluens (Alb. & Schwein.) Kotl. & Pouz.) 분말에 20배 중량의 증류수를 첨가하고 혼합 및 교반하여 분말액을 제조하는 단계;
상기 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 열수추출하는 단계;
멸균하여 열수추출한 분말액 100중량부에 대하여, 다발방패버섯 에탄올 추출물 1중량부를 추가하고, 영양배지(YM broth, BD)에서 24시간 동안 배양한 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae, 생물자원센터, KCTC 7296) 5중량부를 접종하여 25 내지 35℃에서 60 내지 80시간 동안 발효하는 단계;
발효된 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하는 단계; 및
멸균된 발효 분말액을 원심분리 및 필터하여 상등액을 수득하는 단계를 포함하는 다발방패버섯 발효물을 포함하는 항노화 조성물의 제조방법을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물은 발효 또는 비발효된 양털방패버섯(Albatrellus ovinus (Schaeff.) Kotl. & Pouz.), 꽃방패버섯(Albatrellus dispansus (Lloyd) Canf. & Gilb.), 초록방패버섯(Albatrellus caeruleoporus (Peck) Pouz.), 회청색방패버섯(Albatrellus yasudae (Lloyd) Pouzar), 긴다리방패버섯(Albatrellus pes-caprae), Albatrellus cristatus 및 Albatrellus ellisii으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 더 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 다발방패버섯 에탄올 추출물은
방패버섯 분말의 10배 중량의 70% 에탄올을 첨가하는 단계;
30 내지 50℃에서 2 내지 4시간 동안 교반하는 단계;
6000rpm으로 20분간 원심분리 후 0.45um로 여과하는 단계; 및
농축하여 분말로 제조하는 단계를 순차적으로 포함하는 방법으로 제조될 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 항노화가 항열노화, 피부 탄력, 피부장벽 보호, 항산화, 수분 유지 및 항균으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용도를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기한 바와 같은 항노화 조성물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기한 바와 같은 항노화 조성물을 함유하는 건강 기능성 식품 조성물을 제공한다.
기타 본 발명의 구현예들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.
본 발명은 항노화를 위한 유효성분의 함량을 증가시킨 조성물을 제공함으로써 종래의 항노화 조성물의 단점을 해결할 수 있다. 피부 및 체내에서의 자극을 최소화하고, 항노화 효과를 향상시킨 조성물을 제공함으로써 피부 외용제, 화장료 조성물, 기능성 식품 조성물 등으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 폴리페놀 함량을 나타내는 그래프이다.
도 2는 DPPH 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 세포독성 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 칼슘 유입 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 MMP-1 유전자 발현 정도를 나타내는 그래프이다.
도 6은 TRPV1 유전자 발현 정도를 나타내는 그래프이다.
도 7은 각질층의 온도 변화를 나타내는 그래프이다.
도 8은 열화상 카메라 측정 사진이다.
도 9 및 10은 그리폴린(grifolin)의 HPLC 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예를 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
이하, 본 발명의 구현예에 따른 항노화 조성물 및 그 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에 따른 조성물은 피부 노화, 특히 열에 의한 피부 노화를 억제하기 위한 것이다. 피부에는 온도 센서의 역할을 하는 TRPV1(The transient receptor potential cation channel subfamily V member 1) 단백질이 있는데, 본 발명의 조성물에 따르면 이러한 단백질의 활성을 조절하여 열 자극에 의한 피부 손상을 방지하고, 수분 증발을 억제할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 버섯 발효물을 포함할 수 있다. 버섯 발효물에 사용되는 버섯으로는 방패버섯 속을 사용할 수 있으며, 구체적인 예로는 다발방패버섯(Albatrellus confluens (Alb. & Schwein.) Kotl. & Pouz.), 양털방패버섯(Albatrellus ovinus (Schaeff.) Kotl. & Pouz.), 꽃방패버섯(Albatrellus dispansus (Lloyd) Canf. & Gilb.), 초록방패버섯(Albatrellus caeruleoporus (Peck) Pouz.), 회청색방패버섯(Albatrellus yasudae (Lloyd) Pouzar), 긴다리방패버섯(Albatrellus pes-caprae), Albatrellus cristatus 및 Albatrellus ellisii으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있고, 발효 또는 비발효된 것을 사용할 수 있다. 예를 들면 다발방패버섯, 양털방패버섯 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 다발방패버섯 또는 양털방패버섯은 항산화, 항노화, TRPV1 활성 억제의 역할을 할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 버섯 발효물은 효소 또는 효모에 의하여 발효된 것일 수 있으며, 예를 들면, 출아형 효모, 즉, 사카로미세스 세레비시아(Budding yeast; Saccharomyces cerevisiae)에 의하여 발효된 버섯 발효물일 수 있다.
일구현예에 따르면 버섯 발효물은,
방패버섯 분말에 20배 중량의 증류수를 첨가하고 혼합 및 교반하여 분말액을 제조하는 단계;
상기 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 열수 추출하는 단계;
멸균하여 열수추출한 분말액 100중량부에 대하여, 방패버섯 에탄올 추출물 1중량부를 추가한 후, 영양배지(YM broth, BD)에서 24시간 동안 배양한 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)배양액을 5중량부를 접종하여 25 내지 35℃에서 60 내지 80시간 동안 발효하는 단계;
발효된 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하는 단계; 및
멸균된 발효 분말액을 6000rpm으로 20분간 원심 분리 후 0.2um 필터하여 상등액을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명에 따르면, 발효하지 않은 버섯 추출물에 비하여 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid) 등의 지방산(fatty acid), 마그네슘(Mg), 아연(Zn), 구리(Cu)와 같은 미네랄, 그리폴린(grifolin), 폴리페놀(polyphenol), 타닌산(tannic acid) 등의 유효성분 함량이 증가된 버섯 발효물을 포함함으로써 피부의 온도를 저하시키는 동시에 수분을 보충하고 손상된 피부 장벽을 보호 및 강화할 수 있다. 그 중, 특히 그리폴린은 TRPV1(transient receptor potential cation channel subfamily V member 1)라고 불리는 온도수용체를 조절하여 피부의 온도상승에 의한 노화를 억제하고, 항염, 항암 역할을 하며 본 발명에 따른 방법으로 그리폴린을 함유하는 버섯 발효물을 제조할 수 있다.
일구현예에 따르면 상기 방패버섯 에탄올 추출물은,
방패버섯 분말의 10배 중량의 70% 에탄올을 첨가하는 단계;
30 내지 50℃, 예를 들면 45℃에서 2 내지 4시간, 예를 들면 3시간 동안 교반하는 단계; 및
6000rpm으로 20분간 원심분리 후 0.45um로 여과하는 단계; 및
농축하여 분말로 제조하는 단계를 순차적으로 포함하는 방법으로 제조할 수 있다.
상기 방패버섯 추출물은 방패버섯 발효물 제조 단계 중, 어느 단계에서도 첨가할 수 있으나, 예를 들면 발효초기인 균주 접종 전 단계에서 추가하는 경우 발효를 통해 폴리페놀 함량과 효능을 증가시킬 수 있다.
상기한 바와 같은 방법으로 제조된 본 발명의 조성물은 항노화 효과를 향상시킬 수 있으며, 상기 항노화 효과는 항열노화, 피부 탄력, 피부장벽 보호, 항산화, 수분 유지 및 항균으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
실시예: 버섯 발효물 제조
버섯 발효물을 제조하기 위하여 방패버섯 속 중 다발방패버섯(Albatrellus confluens, 핀란드 수급, 분말)을 사용하였다. 다발방패버섯 분말에 그의 20배 중량에 해당하는 양의 증류수를 첨가하고 혼합 및 교반하여 분말액을 제조하였다. 분말액을 121℃에서 15분간 멸균하여 발효 전처리하였다. 멸균하여 열수추출한 분말액 100중량부에 대하여 다발방패버섯 에탄올 추출물 1중량부를 추가한 후, 영양배지(YM broth, BD)에서 24시간 동안 배양한 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae, https://kctc.kribb.re.kr/ KCTC, 생물자원센터, KCTC 7296) 배양액을 5중량부 접종하여 30℃로 72시간 발효하였다.
상기 다발방패버섯 에탄올 추출물은 다발방패버섯 분말의 10배 중량의 70% 에탄올을 첨가하여 45℃에서 3시간 동안 교반하고, 6000rpm으로 20분간 원심분리 후 0.45um로 여과하고, 여과한 다발방패버섯 에탄올 추출물을 농축하여 분말로 제조하였다.
발효된 분말액을 121℃에서 15분간 멸균하고, 6000rpm으로 20분간 원심 분리 후 0.2um로 여과하여 버섯 발효물인 상등액을 수득하였다.
수득된 버섯 발효물의 물성은 다음과 같다.
성상: 액체
색: 밝은 갈색 또는 갈색
향: 특유의 냄새
비중(specific gravity) (d20/20): 1.000~1.040
pH (25℃) : 5.64ㅁ1
굴절률(refractive index) (n20/D): 1.3000~1.4000
총 미생물 수(total microorganism count): < 100 CFU/g
비교예: 버섯 추출물 제조
버섯 추출물을 제조하기 위하여 다발방패버섯(Albatrellus confluens, 핀란드 수급, 분말)에 그의 20배 중량에 해당하는 양의 증류수를 넣고 혼합 및 교반하여 분말액을 제조하였다. 분말액을 121℃에서 15분간 멸균한 열수추출물에 실시예와 동일한 방법으로 제조한 다발방패버섯 70% 에탄올 추출물 1%를 추가한 분말액을 6000rpm으로 20분간 원심 분리 후 0.2um로 여과하여 방패버섯 추출물을 제조하였다.
실험예 1: 폴리페놀 함량
비교예에 따른 다발방패버섯 추출물(Albatrellus confluens extract)과 실시예에 따른 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract) 각각의 총 폴리페놀(total polyphenol) 함량을 비교하기 위하여 Folin&Ciocalteu's phenol 시약을 이용하여 정량하였다. 표준물질로는 갈릭산(gallic acid)를 사용하였다. 시료와 표준물질을 50% Folin&Ciocalteu's phenol과 4:1 비율로 혼합하여 상온에 5분간 반응시킨 뒤, 2% Na2CO3 용액 동량을 첨가하여 상온에 30분간 반응시켰다. 표준 물질은 100, 80, 60, 40, 20ug/ml 농도로 사용하고 각각의 흡광도를 추후 standard curve를 그리는데 사용하였다. 반응 후, 흡광도 측정 기기 Multiskan GO(Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 750 nm에서 흡광도를 측정하고, 표준 물질의 흡광도 값에 대비하여 발효 전, 후의 Total polyphenol 양을 비교하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었으며, 도 1에 나타난 바와 같이 본 발명에 포함되는 버섯 발효물은 발효하지 않은 발효 추출물에 비하여 총 폴리페놀의 함량이 약 25% 증가한 것을 확인할 수 있다.
실험예 2: 항산화 분석
비교예에 따른 다발방패버섯 추출물(Albatrellus confluens extract)과 실시예에 따른 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)의 항산과 효과를 확인하기 위하여 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능 분석을 실시하였다. 1 mM DPPH 용액을 메탄올에 녹여 즉시 사용하였다. 시료 용액과 DPPH 용액을 1:1로 혼합하여, 상온 암소에 20 분간 방치하였다. 이때 양성 대조군(positive control)로 아스코르브산(ascorbic acid) 0.1 mg/ml을 사용하였다. 20분 방지 후, 흡광도 측정 기기 Multiskan GO(Thermo Fisher Scientific) 를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군(control)대비 라디컬 율(%)를 산출하였다. 그 결과는 도 2에 나타내었으며, 그래프에 나타난 바와 같이 다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)의 항산화 효능이 발효 전 시료에 비해 높아진 것을 확인할 수 있으며, 특히 발효물 1000ug/ml의 농도에서 약 80%의 자유라디칼 소거능을 나타내는 것을 확인하였다.
실험예 3: 세포독성
비교예에 따른 다발방패버섯 추출물(Albatrellus confluens extract)과 실시예에 따른 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)의 세포독성을 확인하기 위해서 HaCaT 각질세포의 증식에 미치는 영향을 시험하였으며, 배양된 HaCaT 각질세포에 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract), 다발방패버섯 추출물(Albatrellus confluens extract)을 각각의 농도로 처리한 후, 세포 생존율을 측정하였다. MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 사용하여 측정하였으며, MTT는 세포 내로 흡수되어 미토콘드리아에서 숙신산탈수효소에 의해 포르마잔을 형성하는데, 이 물질의 세포 내 축적은 미토콘드리아의 활성, 넓게는 세포의 활성을 의미하므로 세포의 독성 평가를 할 수 있다.
96 well plate에 각각의 셀을 2 X 104 cells/well로 분주한 뒤, 24시간 세포 배양기에 배양하였다. 배양 후, 1% FBS를 포함하는 배지로 배지를 교체하여 기아상태(starvation)로 만들어 24시간 배양하였다. 다발방패버섯 추출물(Albatrellus confluens extract), 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)를 각각의 농도로 처리하여 24시간 배양한 후, MTT solution을 처리하고 4시간 배양하였다. 배양 후, 배지를 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)로 세포를 완전히 녹인 후, 흡광도 측정 기기 Multiskan GO(Thermo Fisher Scientific)로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과를 바탕으로 아래의 세포생존율을 산출식을 통해 세포의 생존율을 시료를 처리하지 않은 군과 비교하여 %로 나타내었다.
세포 생존율(%) = [시료첨가군의 흡광도 (450 nm) / 시료 무첨가군의 흡광도 (450 nm)] × 100
그 결과는 도 3에 나타내었다. HaCaT 각질세포에 대한 다발방패버섯추출물(Albatrellus confluens extract), 다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)의 독성을 나타내지 않는 농도를 확인하였다. 추후 실험에 독성 결과를 바탕으로 시료의 농도를 결정하였다. 도 3의 그래프에 나타난 바와 같이, 발효물은 HaCaT 세포에 대하여 250ug/ml 농도 이하에서 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있다.
실험예 4: 칼슘 유입
열 또는 화학적 자극의 감지에 의하여 TRPV1 이 활성화되어 칼슘(Ca2+)의 세포 내 유입이 유도되며, 이로 인하여 세포의 노화가 유도되므로 칼슘의 유입을 확인함으로써 세포의 노화 정도를 확인하였다.
다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)과 다발방패버섯추출물(Albatrellus confluens extract)이 세포 내 칼슘이온 유입을 억제하는지를 확인하기 위해 칼슘이온을 형광으로 염색하여 그 양의 변화를 시각적으로 확인하였다. 42℃ 이상의 온도, 캡사이신(capsaicin), 산성 조건과 같은 자극에 의해서 TRPV1(The transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1)이 활성화 되면 세포 외부의 칼슘이온이 세포 내부로 이동한다. 세포 내 칼슘이온 변화를 확인함으로써 TRPV1의 활성 정도를 확인할 수 있다.
96 well plate에 각각의 셀을 1 X 104 cells/well로 분주한 뒤, 24시간 세포 배양기에 배양하였다. 배양 후, 1% FBS를 포함하는 배지로 배지를 교체하여 기아상태(Starvation)로 만들어 24시간 배양하였다. 다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)과 다발방패버섯추출물(Albatrellus confluens extract)을 농도에 맞게 처리한 후, 30분 배양하였다. 이때 대조군으로 5μM 캡사제핀(Capsazepine)을 사용하였다. Calcium Kit; Fluo-8 No wash Calcium Assay Kit(abcam)을 사용하여 loading solution을 처리하고 암 조건에서 37℃에서 30분, 실온에서 30분 배양하였다. 5 μM 캡사이신(capsaicin)을 처리하고 즉시 Cytell 기기로 세포 사진을 촬영하고 세포 내 칼슘이온 변화량을 확인하였다. 그 결과는 도 4에 나타내었으며, 캡사이신 자극에 의한 칼슘이온(calcium ion)의 세포 내 유입이 다발방패버섯 발효물에 의하여 억제된 것을 확인할 수 있다.
실험예 5: TRPV1 및 MMP-1 발현
다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)과 다발방패버섯추출물(Albatrellus confluens extract)이 TRPV1(The transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1)과 MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)의 mRNA 발현량을 조절하는지를 확인하는 실험을 진행하였다. 6 well plate에 1 X 106 cells/well로 분주한 뒤, 24시간 세포 배양기에 배양하였다. 배양 후, 1% FBS를 포함하는 배지로 배지를 교체하여 기아상태(Starvation)로 만들어 24시간 배양하였다. 다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)과 다발방패버섯추출물(Albatrellus confluens extract)을 농도에 맞게 처리한 후, 30분 배양하였다. 이때 대조군으로 5 μM 캡사제핀(Capsazepine)을 사용하였다. 10 μM 캡사이신(capsaicin)을 처리하고, 24시간 배양하였다. 배지를 제거하고 RNA extract kit(TaKaRa MiniBest RNA Extraction Kit)를 사용하여 RNA를 추출하고, Qubit Fluorometer (Qubit 2.0 Fluorometer, life technologies)를 이용하여 RNA를 정량하였다. High-Capacity RNA-to-cDNA kit(applied biosystems)를 이용하여 동일한 양의 RNA로 cDNA를 합성하였다. Taqman primer TRPV1, MMP-1, GAPDH는 life technologies사에서 구입해서 사용하였다. Taqman master mix를 하용하여 Real time PCR 장비 Step One Plus Real-Time PCR(Applied Biosystem)를 이용하여 원하는 유전자(gene)를 증폭하여 유전자 발현량의 변화를 확인하였다. MMP-1 유전자 발현량의 확인 결과는 도 5에 나타내었고, TRPV1 유전자 발현량의 확인 결과는 도 6에 나타내었다. 도 5 및 6에 나타난 바와 같이, 다발방패버섯발효물(Albatrellus confluens ferment extract)이 캡사이신(capsaicin)에 의해 활성화된 TRPV1 및 MMP-1의 mRNA 발현을 억제하는 것을 확인할 수 있다.
실험예 6: 피부 온도 저하
21명의 피험자를 선정하여 시험자가 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)을 포함하는 크림을 안면부 시험 부위에 일회 도포한 후 열화상 카메라를 이용하여 피부 온도의 즉각적인 변화를 분석하였다. 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)을 포함하는 크림을 사용하였을 때, 이를 포함하지 않는 크림을 사용하였을 때보다 통계적으로 유의한 수준으로 피부 온도가 감소하는 것을 확인하였다. 구체적으로 도 7에 실시예에 따른 다발방패버섯 발효물을 포함하는 크림의 도포 전, 후 각질층 온도 변화량을 나타내었으며, 그래프에서 확인할 수 있는 바와 같이, 시험부위에서 평균 2.63℃ 피부 온도 저하 효과를 나타냄을 알 수 있다. 또한, 도 8에 열화상 카메라 측정 사진을 나타내었으며, 실시예에 따른 발효물을 도포한 시험 부위인 좌측 볼의 온도 변화를 확인할 수 있다.
상기의 결과로부터 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)이 즉각적인 피부 온도 저하(쿨링) 효과를 가지는 것을 확인하였다.
실험예 7: 그리폴린(Grifolin)
실시예에 따른 다발방패버섯 발효물(Albatrellus confluens ferment extract)에 대하여 고성능 액체 크로마토그래피(high-performance liquid chromatography, HPLC) 분석으로 그리폴린(grifolin)을 확인하였다.
분석 조건은 다음과 같다.
Girfolin의 HPLC 분석 조건
Instrument: Waters 2695 & 996
Detection: UV 213nm
Column: Agilent Eclipse XDB-C18, 5μm, 4.6 x 150 mm
Column Temp.: 25℃
Mobile phase: Acetonitrile 75%:0.01% phosphoric acid in DW 25%
Flow rate: 1.0 mL/min
Injection: 20 μL
그리폴린의 스탠다드 분석 피크는 도 9에 나타내었고, 다발방패버섯 발효물(Albatrellus ovinus ferment extract)의 결과는 도 10에 나타내었다.
도 9 및 10로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 버섯 발효물은 그리폴린을 함유하고 있음을 확인하였다.
상기 결과에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따르면 그리폴린 및 폴리페놀과 같은 유효성분을 함유한 조성물을 수득할 수 있고, 세포 독성이 없이 항산화 효능을 향상시킬 수 있으며, 칼슘 이온의 세포 내 유입을 억제함으로써 TRPV1 및 MMP-1의 활성을 저해하여 피부 노화 및 탄력 저하를 방지할 수 있고, 즉각적 피부 온도 저하 효과를 향상시킴으로써 피부 노화를 더욱 효과적으로 억제할 수 있다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 또한, 본 발명에 개시된 실시 예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (7)

  1. 다발방패버섯 분말에 20배 중량의 증류수를 첨가하고 혼합 및 교반하여 분말액을 제조하는 단계;
    상기 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 열수추출하는 단계;
    멸균하여 열수추출한 분말액 100중량부에 대하여, 다발방패버섯 에탄올 추출물 1중량부를 추가하고, 영양배지(YM broth, BD)에서 24시간 동안 배양한 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae, 생물자원센터, KCTC 7296) 5중량부를 접종하여 25 내지 35℃에서 60 내지 80시간 동안 발효하는 단계;
    발효된 분말액을 110 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 멸균하는 단계; 및
    멸균된 발효 분말액을 원심분리 및 필터하여 상등액을 수득하는 단계를 포함하고,
    상기 다발방패버섯 에탄올 추출물이,
    다발방패버섯 분말의 10배 중량의 70% 에탄올을 첨가하는 단계;
    30 내지 50℃에서 2 내지 4시간 동안 교반하는 단계;
    6000rpm으로 20분간 원심분리 후 0.45um로 여과하는 단계; 및
    농축하여 분말로 제조하는 단계를 순차적으로 포함하는 방법으로 제조되는 다발방패버섯 발효물을 포함하는 항열노화용 조성물의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물이 발효 또는 비발효된 양털방패버섯(Albatrellus ovinus (Schaeff.) Kotl. & Pouz.), 꽃방패버섯(Albatrellus dispansus (Lloyd) Canf. & Gilb.), 초록방패버섯(Albatrellus caeruleoporus (Peck) Pouz.), 회청색방패버섯(Albatrellus yasudae (Lloyd) Pouzar), 긴다리방패버섯(Albatrellus pes-caprae), Albatrellus cristatus 및 Albatrellus ellisii으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 더 포함하는 것인, 항열노화용 조성물의 제조방법.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항 또는 제2항에 따른 제조방법으로 제조되는 항열노화용 조성물.
  6. 제5항에 따른 조성물을 함유하는 항열노화용 화장료 조성물.
  7. 제5항에 따른 조성물을 함유하는 항열노화용 건강 기능성 식품 조성물.
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